Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展快速的过程中逐渐扩展

从第一次再次造出现肾脏自身免疫球复合物到再次造出现1型号哮喘临床高血压的令人满意率在幼儿时期就有很好的描绘造出，多个肾脏自身免疫球复合物无症状的幼儿中都有70%在血清转换后10年内患哮喘，而随访15年的幼儿这一分之一减低到84%。相较之下，占临床1型号哮喘一半以上的型号1型号哮喘的发病有助于还没有得到充分的研究工作。

越来越多的人开始用作分段系统来表述1型号哮喘的令人满意：个纤在再次造出现多种肾脏自身免疫球复合物时带入第1收尾，再次造出现血糖异常时带入第2收尾，再次造出现高血压时带入第3收尾。一些多发肾脏自身免疫球复合物无症状的个纤，在1期和2期，令人满意较极快，并发展为发病的1型号哮喘。我们之前描绘造出了一分组在首次检查到多种肾脏自身免疫球复合物结果说明了后至少10年无哮喘的极极快令人满意者，这分组高血压总人数少，但特性非常确切。随后，我们发现肾脏自身上皮细胞特异性CD8+T细胞核反应会在令人满意平稳的高血压中都前提不共存，但在最近发病和由来已久的哮喘高血压中都很很难检查到。这意味著证明，与令人满意高血压相较，这些高血压自身免疫反应会的通气增强。

早期研究工作证明，尽管通气性T细胞核(Treg)数量经常性，但哮喘高血压共存一些功能缺点，其中都除此以外对IL-2的反应会灵活性减低。此外，哮喘高血压中都的畸变CD4+T细胞核意味著对通气更具抵抗性，发挥为畸变T细胞核的诱发向西移动，自然产生的Treg和纤外产生的正向Treg，以及上皮细胞亲身经历的CD4+T细胞核中都IL-2反应会向西移动。本研究工作的目标是描绘造出了CD4+通气性T细胞核(Treg)在一小群极平稳令人满意者中都的特性，他们的平均比率为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群系统化的纵向研究工作，在21岁以下确诊的高血压血亲中都检查1型号哮喘的生命危险原因。我们之前描绘造出了长年平稳令人满意者的特性，他们维持多重肾脏自身免疫球复合物无症状最少10年，但没有再次造出现哮喘的临床高血压，极快性或非顺利外阴自身免疫。随后，10名继续维持无哮喘并想要缺少大量血清结果说明了的平稳令人满意者纳入T和B细胞核功能归纳。在目前的研究工作中都，8名极快令人满意者(SP分组)，中都位比率43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的肾脏自身免疫球复合物无症状。所有的自发性都西北面1型号哮喘令人满意的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身免疫球复合物对某些上皮细胞的无症状反应会，然而，一名高血压从未西北面2期至少6年，但没有再次造出现临床高血压，一名高血压被诊断为哮喘，该受试者72岁，在通过观察实验结果说明了时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳中都对该丝氨酸顺利进行了单独审计。分离外周血单个核细胞核(PBMCs)，改用多数值流式细胞核绝技和T细胞核诱发试验审计丝氨酸中都Treg的基频、表观号和功能。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、比如说和重回)顺利进行无都由聚类归纳，审计Treg表观号。

结果：与保健丝氨酸相较，来自极快令人满意纤的心灵CD4+T细胞核的都由聚类说明了，抑制的心灵CD4+ Treg基频减低，与糖皮质激素正向的TNFR关的复合物(GITR)隐含减低有关。一名HbA1c升高的高血压与令人满意平稳者和比如说的对照分组相较，Treg谱有所不尽相同。功能归纳证明，与保健丝氨酸相较，来自平稳令人满意纤的Treg诱导的CD4+畸变T细胞核诱发明显毁损。发挥为对畸变CD4+T细胞核CD25和CD134隐含的诱发减低。

示意图1 深入的表观号归纳说明了，CD4+Treg流感病毒号在极快令人满意队列中都减低。由FlowSOM转化成的Treg四楼，群聚在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据记号物隐含鉴定造出10个元簇:心灵T细胞核_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞核;HLA-DR + GITR +心灵T细胞核;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)用作9个不尽相同Treg记号转化成的10个元簇的MST。每个结点代表一个空降兵(100个空降兵)，极大的元空降兵(10个元空降兵)在结点分组外面打磨。每个结点中都的粥示意图暗示单个记号的隐含级别。(b)每个元聚类的热示意图，以说明了整纤记号隐含。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)转化成示意图，以及FlowSOM比对的每个元簇的裂口。(e-l)比较丰度为每个metacluster木箱新点阵示意图(丰度> 0.05%)确切为HD和SP分组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞核(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞核(l)。橙色橘色代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon类推字母秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 用作CITRUS的预测模型号声称，Treg基频的减低是令人满意平稳的示意图案。分级制度旁路(a - f)和柑橘归纳(g-k)比较SP自发性和比如说的HD自发性在CD4+CD45RA−T细胞核上的差别。(a)性状CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的权威性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3可溶性，然后通过HLA-DR和GITR隐含顺利进行分离，模拟FlowSOM群纤。(b) HD(网纹)和SP(蓝点)分组以及丝氨酸SP 606(橙色)中都CD25+ cd127的基频统计示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路同构的木箱新点阵示意图;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度着色，箭头突造出的簇被比对为SP和HD队列密切关系的不尽相同。(j)木箱新点阵示意图说明了了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组中都，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的比较丰度(分之一)。(k)概率分布说明了每个簇的表观号(粉红色)和Treg记号比较隐含与背景隐含(浅蓝色);上列，CPUTreg_3;下面几同月，CPUTreg_4。背景与所有其他簇中都记号的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon类推字母秩检验

示意图3 与保健献血者相较，令人满意平稳者心灵treg的GITR减低。每个心灵CD4+T细胞核元簇(心灵T细胞核_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞核;HLA-DR + GITR +心灵T细胞核;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个隐含记号的叠加。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的隐含热示意图(sp606不除此以外在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR隐含串联，说明了概率分布(c)和统计示意图(d)。Wilcoxon类推字母秩和检验，p< 0.07(橙色)所有丝氨酸除此以外，p< 0.05(浅蓝色)丝氨酸SP 606和比如说的HD不除此以外在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR隐含，从分级制度旁路，从所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(橙色)串联，说明了概率分布(e)和统计示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon类推字母秩检验

示意图4 来自平稳令人满意的CD4+ treg细胞核控制畸变CD4+T细胞核的灵活性减低。SP分组用浅蓝色的新线和橘色暗示，HD分组用蓝色的新线和橘色暗示，橙色的新线/橘色暗示丝氨酸sp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被记号为CFSE, Treg按观察的分之一溶液。用抗CD3 /28微珠正向细胞核，养成3同月顺利进行流式细胞核绝技检查。(a-d)与CD4+需要的话者比较应的treg养成(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者养成。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE诱发倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发倍数。用作无症状对照(抑制的响应细胞核不含treg)数值诱发倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 畸变CD4+T细胞核对平稳令人满意的T细胞核正向的诱发更敏感。SP分组用浅蓝色的新线和橘色暗示，HD分组用蓝色的新线和橘色暗示，橙色的新线/橘色暗示丝氨酸sp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel记号，treg按观察的分之一溶液。用抗CD3 /28微珠正向细胞核，养成3同月顺利进行流式细胞核绝技(CD25反染)和细胞核因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同养成。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE诱发百分率(b)。(c,d) CD25诱发百分率(c)和CD134诱发百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成中都的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

推论：我们得造出的推论是，来自平稳令人满意子的正向心灵CD4+Treg在GITR隐含中都得到了拓展和丰富多彩，突显了进一步研究工作Treg在1型号哮喘安全性个纤中都的异质性的必要性。

中文翻译注解：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28